今天，上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司要與大家分享ELISA試劑盒技術(shù)的一些相關(guān)知識(shí)，希望能夠幫助到大家。

一、實(shí)驗(yàn)原理：

結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體與受檢標(biāo)本（抗原或抗體）起反應(yīng)。用洗滌的方法洗去未結(jié)合的抗原或抗體。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。根據(jù)實(shí)際的應(yīng)用方法，可以分成以下幾種：

• 雙抗夾心 ELISA：將捕獲抗體包被在固相載體上，封閉后加入待檢抗原，溫育后加入酶標(biāo)檢測(cè)抗體，捕獲抗體和檢測(cè)抗體可以是針對(duì)不同表位的兩種單抗，也可以是針對(duì)同一抗原的一種單抗與一種多抗，但是檢測(cè)抗體需要經(jīng)過酶標(biāo)。

• 競(jìng)爭(zhēng)ELISA：用待檢抗原或抗體去干擾已經(jīng)預(yù)先設(shè)計(jì)好的體系，zui終顯色的結(jié)果與待檢抗原或抗體的干擾程度成負(fù)相關(guān)。主要應(yīng)用于只有一個(gè)抗原表位的蛋白檢測(cè)。

• 多因子ELISA檢測(cè)技術(shù)：多重ELISA芯片技術(shù)通過在96孔板的每個(gè)孔中以陣列的形式植入1~25種捕獲抗體，隨后像ELISA一樣操作，通過化學(xué)發(fā)光(HRP酶)和熒光燃料(紅外)來檢測(cè)。

受刺激的細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子是短暫的，并且不同細(xì)胞因子基因表達(dá)的動(dòng)力學(xué)是變化的。通過ELISA實(shí)驗(yàn)只能檢測(cè)到的免疫反應(yīng)性的細(xì)胞因子蛋白的含量，而這并不能*代表細(xì)胞因子的生物活性的水平。例如，使用抗細(xì)胞因子抗體的一種ELISA不能區(qū)別如TGF-β1的細(xì)胞因子蛋白是無活性的前體形式還是有活性的成熟蛋白。此外，一種ELISA可以檢測(cè)部分降解的細(xì)胞因子蛋白，它們?nèi)杂忻庖叻磻?yīng)性（例如至少可識(shí)別兩個(gè)表位），當(dāng)時(shí)它可能卻喪失了它們的生物學(xué)活性。

二、實(shí)驗(yàn)過程：

包被酶標(biāo)版>封閉 >加樣品孵育>洗滌 >加抗體孵育>洗滌 >加入酶底物>終止反應(yīng) >讀數(shù)

三、ELISA操作要點(diǎn)：

1. 選擇合適的固相載體；

2. 選擇合適的包被緩沖液；

3. 確定*包被量；

4. 加樣準(zhǔn)確，避免產(chǎn)生氣泡。

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