本技術(shù)文章中，上海恒遠(yuǎn)生化試劑有限公司為您推薦兩種ELISA檢測的重點方法，分別是用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法、用于檢測未知抗體的間接法。歡迎您耐心閱讀！
方法一：用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法
1. 包被：用0.05M PH9.6 碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測O?D值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
方法二：用于檢測未知抗體的間接法
1. 用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml， 每孔加0.1ml，4℃放置一個晚上。次日洗滌3次。
2. 加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時，洗滌。
2. 同時做空白、陰性及陽性孔對照于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體0.1ml， 37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
4. 其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。
注意事項：
   正式試驗時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高，說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。